Construction and expression of the recombinant plasmid pVIVO2-IL-12-Sj-14FABP for Schistosoma japonicum
Author(s): ZHU Xiaohua, SHI Youen, GAN Yan
Pages: 14-17
Year: 2005 Issue: 1
Journal: CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
Keyword: 日本血吸虫; Sj14FABP; IL-12; 重组质粒; 表达;
Abstract: 目的构建日本血吸虫14kDa脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)和细胞因子IL-12共表达质粒,并观察其能否在小鼠体内获得表达.方法 TRIzol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,采用RT-PCR方法逆转录Sj14FABP编码基因序列,经过双酶切后定向克隆到载体pVIVO2-IL12中,通过PCR、酶切及测序进行鉴定.大量制备重组质粒pVIVO2-IL12-Sj14FABP并免疫BALB/c小鼠,取注射部位肌肉组织进行间接免疫荧光试验.结果 RT-PCR扩增出一条大小为440bp的片段; 经PCR、酶切及测序鉴定表明所构建的重组质粒中含有Sj14FABP基因;间接免疫荧光试验结果为阳性.结论本试验成功构建重组质粒pVIVO2-IL12-Sj14FABP,并在小鼠体内获得表达.
Pages: 14-17
Year: 2005 Issue: 1
Journal: CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
Keyword: 日本血吸虫; Sj14FABP; IL-12; 重组质粒; 表达;
Abstract: 目的构建日本血吸虫14kDa脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)和细胞因子IL-12共表达质粒,并观察其能否在小鼠体内获得表达.方法 TRIzol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,采用RT-PCR方法逆转录Sj14FABP编码基因序列,经过双酶切后定向克隆到载体pVIVO2-IL12中,通过PCR、酶切及测序进行鉴定.大量制备重组质粒pVIVO2-IL12-Sj14FABP并免疫BALB/c小鼠,取注射部位肌肉组织进行间接免疫荧光试验.结果 RT-PCR扩增出一条大小为440bp的片段; 经PCR、酶切及测序鉴定表明所构建的重组质粒中含有Sj14FABP基因;间接免疫荧光试验结果为阳性.结论本试验成功构建重组质粒pVIVO2-IL12-Sj14FABP,并在小鼠体内获得表达.
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