Author(s): ZHANG (weihua), XIE Qing, ZHOU Xiaqiu, JIANG Shan, JIN Youxin
Pages: 684-687
Year: 2004 Issue:  11
Journal: CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
Keyword:  核酶; 半胱氨酸蛋白酶-7; 体外转录; 切割;
Abstract: 目的设计并合成抗小鼠半胱氨酸蛋白酶-7(caspase-7)的锤头状核酶,并对它们的体外表达与体外切割活性进行研究. 方法采用计算机软件对锤头状核酶和小鼠caspase-7基因的二级结构进行分析,核酶的DNA序列在体外由自动合成仪合成,小鼠caspase-7目的基因通过RT-PCR扩增获得,将核酶基因和caspase-7基因分别克隆入载体pBSKneoU6′和pGEM-T中,通过体外转录得到核酶和caspase-7mRNA,通过体外切割筛选出具有切割活性的核酶.结果针对目的基因的333和394位点设计合成了两个核酶:Rz333和Rz394.成功获得caspase-7 mRNA的表达载体pC7及含有核酶的重组质粒pU6Rz333和pU6Rz394,通过体外转录表达出含有caspase-7 mRN A的987 nt的靶mRNA及完整的核酶Rz333(47 nt)和Rz394(50 nt).体外切割实验证实Rz333能够定点切割caspase-7 mRNA,产生243 nt和744 nt的切割产物,切割效率为67.98%.Rz394不能切割靶基因.结论核酶Rz333能够位点特异性的切割caspase-7 mRNA.