Author(s): NIU Chuanshuang, FANG Liurong, XIAO Shaobo, ZHANG Hui, CHEN Huanchun
Pages: 489-491
Year: 2004 Issue:  5
Journal: JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
Keyword:  绿荧光蛋白; 突变体mut4EGFP; 表达; 纯化;
Abstract: 增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP(EGFP/V163A/S175G)是一种发光能力更强、更稳定的新型绿色荧光蛋白.为了获得大量高纯度的蛋白,将mut4EGFP基因插入原核表达载体pTWIN1中,使之与几丁质结合域(CBD)-内含肽(intein)融合,获得原核表达质粒pTWIN-M4.将pTWIN-M4转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,CBD-intein-mut4EGFP融合蛋白在BL21(DE3)plysS中获得高效表达并以可溶性蛋白的形式存在.进一步采用几丁质柱纯化系统对表达产物进行纯化,得到了高纯度的mut4EGFP.