Author(s): SUN Xiao-min, HAO Wen-bo, WANG Ping, LI Ming, JIA Yu-hua
Pages: 128-130,115
Year: 2005 Issue:  2
Journal: JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
Keyword:  恶性疟原虫; EBA- 175; 分子克隆; 基因表达;
Abstract: 目的构建 EBA- 175Ⅱ区 F2结构域基因的原核表达载体. 方法采用 PCR的方法从恶性疟原虫基因组 DNA中扩增出 EBA- 175Ⅱ区 F2结构域 856～ 1848 bp基因,定向克隆入 PMD18- T质粒,再经 BamHⅠ和 XhoⅠ酶切亚克隆入高效表达载体 pET23a(+ ).重组质粒经 PCR、酶切、测序鉴定后,在 BL21( DE3)菌株中进行 IPTG诱导表达.结果重组质粒经序列测定证实插入基因为目的基因,符合表达框架,经 IPTG诱导,在 BL21( DE3)菌株中以非融合蛋白形式表达, SDS- PAGE电泳显示在约 36.4 kDa处可见明显蛋白增粗条带,与预期结果一致.结论成功构建了重组 EBA- 175Ⅱ区 F2结构域基因表达载体,并在 BL21( DE3)中有效表达.