Author(s): WU Yuan-zhou, WANG Qiu-ping, XIAO Dan, ZHU Ya-ru, FANG Shun
Pages: 1035-1041
Year: 2019 Issue:  6
Journal: Chinese Journal of Pathophysiology
Keyword:  肺癌; Let-7a-3p; 胰岛素样生长因子1受体; 肿瘤干细胞;
Abstract: 目的:研究let-7a-3p对人肺癌细胞A549的肿瘤干细胞活性的影响及其相关机制.方法:RT-qPCR法比较肺癌细胞系A549、NCI-H1299、SPC-A1、H1650和HCC-827及人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B中let-7a-3p的水平.A549肺癌细胞株分别转染let-7a-3p模拟物(let-7a-3p mimics)和其阴性对照(negative control mimic),分别作为let-7a-3p组和negative control组,并设立未转染对照(non-transfected)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞let-7a-3p的水平.瘤球形成实验检测3组肿瘤干细胞瘤球形成能力.流式细胞术检测肿瘤干细胞比例.Western blot法检测3组细胞NANOG、OCT4和胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)的蛋白表达水平.运用生物信息学方法预测let-7a-3p的靶基因,双萤光素酶实验检测let-7a-3p与IGF1R的关系.Western blot法检测IGF1R过表达对let-7a-3p抑制肿瘤干细胞的拮抗作用.建立皮下移植瘤模型观察let-7a-3p的体内作用.结果:肺癌细胞系中let-7a-3p的表达水平均明显低于正常支气管上皮细胞系(P<0.01).let-7a-3p组A549细胞中let-7a-3p的表达水平较non-transfected组明显上调(P<0.01).瘤球形成实验发现,let-7a-3p组的瘤球数量明显低于non-transfected组.流式细胞术检测发现,let-7a-3p组的CD133+细胞比例明显低于non-transfected组(P<0.01).Western blot实验显示,let-7a-3p组的NANOG蛋白和OCT4蛋白表达量比non-transfected组明显降低(P<0.01).生物信息学预测结果表明,let-7a-3p与IGF1R的3'-UTR区部分互补,IGF1R可能是let-7a-3p的靶基因.双萤光素酶实验证实,IGF1R为let-7a-3p的直接下游靶基因.Let-7a-3p组的IGF1R蛋白表达量明显降低(P<0.01).Let-7a-3p组的皮下移植瘤明显小于non-transfected组.结论:let-7a-3p可能通过降低下游靶基因IGF1R的水平影响肺癌干细胞相关蛋白表达,抑制肺癌干细胞潜能.