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tuo yang gui jiu du su dui mei zhou da zuo yi zuo dan jian shou ti xin hao tong lu fen zi mrna biao da shui ping de ying xiang
Author(s): 
Pages: 772-778
Year: Issue:  7
Journal: Acta Entomologica Sinica

Keyword:  美洲大蠊脱氧鬼臼毒素实时荧光定量PCR基因克隆N型乙酰胆碱受体信号分子;
Abstract: 【目的】探讨脱氧鬼臼毒素(deoxyopodophyllotoxin,DOP)对美洲大蠊Periplaneta americana神经系统乙酰胆碱受体信号通路的影响。【方法】从美洲大蠊头部克隆乙酰胆碱受体信号通路上的关键信号分子nAChRα6亚基、CaM和CaMKⅡ的部分mRNA,并测定其序列。应用荧光定量PCR技术分别观察注射不同浓度(10,45,80,115和150μg/μL)DOP 24和48 h后上述3种基因表达水平的变化。【结果】测序结果显示,克隆出的美洲大蠊nAChR基因部分序列(539 bp)与赤拟谷盗Tribolium castaneum nAChRα6亚基基因的核苷酸序列一致性为84%;美洲大蠊CaM基因(435 bp)与雕叶蝉Graphocephala atropunctata CaM基因的核苷酸序列一致性为85%;美洲大蠊CaMKⅡ基因(513 bp)与黑腹果蝇Drosophila melanogaster CaMKⅡ基因的核苷酸一致性为77%。实时定量荧光PCR实验表明:DOP处理48 h后对美洲大蠊nAChRα6亚基、CaM和CaMKII基因表达水平大体表现出低剂量激活,高剂量抑制的特点。45~80μg/μL DOP浓度范围内3种基因表达水平达到高峰,80~150μg/μL浓度范围内表现为抑制作用,基因表达水平呈下降趋势。【结论】DOP需要在美洲大蠊体内蓄积一定时间才有明显的作用,能与nAChR结合引起CaM-CaMKⅡ级联反应,使3种基因的表达在低浓度组上调、高浓度组被抑制,进而对美洲大蠊产生潜在的毒杀作用。
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