Author(s): WANG Su-fan, QI Chen, CHEN Bin, WU Kun, CHEN Xiao-guang
Pages: 211-215
Year: 2013 Issue:  3
Journal: CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
Keyword:  刚地弓形虫; 棒状体蛋白18; 基因克隆; 原核表达; 免疫分析;
Abstract: 目的 克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析.方法 提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测.结果 PCR得到约1 665 bp目的 基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60 kD的位置出现目的 蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83 kD的位置出现目的 蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性.结论 成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础.