Author(s): REN Yong-hai, LI Xiao-yan, HUANG Lei, XU Zhi-nan
Pages: 377-380
Year: 2012 Issue:  5
Journal: Pharmaceutical Biotechnology
Keyword:  肝素酶Ⅰ;  大肠杆菌;  重组表达;  分离纯化;  分子伴侣;  优化;
Abstract: 优化肝素裂解酶I在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pOFX-T7-SL1中的重组表达条件,结果显示接种6 h(OD600≈2.5)后加入0.25 mmol/L IPTG,在25℃下表达8 h目标蛋白酶活达到最高值1.49×105IU/L。进一步于5 L发酵罐中扩大培养,20 h后最高酶活达到5.55×105IU/L。利用亲和层析分离目标蛋白,肝素裂解酶I的纯度可达到96%,回收率为37.58%,比酶活达到1.12×103IU/mg。肝素裂解酶I的高效表达为大规模利用酶法制备低分子肝素打下了坚实的基础。