Author(s): CHEN Zeng 1, YE Xiu-yun 1, 2, LI Ren-kuan1, 2, FENG Ai-hua 1, LIN Juan1, YANG Jie1, 2
Pages: 551-556
Year: 2012 Issue:  4
Journal: Journal of Fuzhou University(Natural Science Edition)
Keyword:  扁豆;  几丁质酶基因;  克隆;  表达;  纯化;
Abstract: 以扁豆总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增到长度为885 bp的扁豆几丁质酶基因cDNA,其编码294个氨基酸,目的蛋白的分子量为28.429 kDa.以该基因构建pET-21a-chi表达载体并在E.coli BL21(DE3)中表达.30℃下,用0.1 mmol.L-1IPTG,诱导5 h,表达产物的酶活力为36.25 U.mL-1.通过常压Sephadex G-50凝胶过滤色谱,DEAE-650C常压与高效离子交换色谱对表达产物进行纯化.目标蛋白达到电泳纯(SDS电泳一条带),几丁质酶的比活力108.42 U.mg-1.表达的蛋白质产物主要以可溶性形式存在.