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Cloning and expression of nanos, a gene related to germ stem cell and its expression pattern in embryo development in silkworm
Author(s): 
Pages: 1092-1098
Year: Issue:  11
Journal: ACTA ENTOMOLOGICA SINICA

Keyword:  家蚕nanos胚胎发育原始生殖细胞荧光定量PCRWestern blot;
Abstract: [目的]探讨nanos基因在家蚕Bombyx mori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础.[方法]根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684 bp的编码片段,对该片段进行了克隆和表达,亲和纯化表达的蛋白并免疫新西兰大白兔制备抗体.Western blot检测家蚕早期胚胎nanos的表达情况,荧光定量PCR检测nanos在整个家蚕胚胎发育中的表达情况.[结果]克隆并表达了一条长684 bp的编码片段,得到了分子量约33 kD的融合蛋白.用制备的抗血清对家蚕早期胚胎蛋白的Western blot检测表明,nanos在此阶段基本是恒定表达.荧光定量PCR结果显示刚产的卵中nanos的表达量最大,第2天开始急剧下降,此后到第10天表达量几乎没有变化.[结论]本实验克隆的nanos是家蚕中的一个同源物,该基因在家蚕胚胎发育中的表达模式与蜜蜂等有很大的不同,反映了昆虫生殖细胞形成机制的多样性.
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