Author(s): CHEN Jin-jun, MA Shi-wu, WANG Zhan-hui, SUN Jian, HOU Jin-lin
Pages: 33-37
Year: 2008 Issue:  1
Journal: CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
Keyword:  肝炎病毒; 乙型; 抗药性; 突变; 多态性; 限制性片段长度; 阿德福韦;
Abstract: 目的 设计PCR联合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)快速检测HBV阿德福韦耐药变异(rtN236T)的方法以及观察阿德福韦耐药毒株的动态变化情况.方法 7例乙型肝炎患者在阿德福韦单药治疗过程中出现病毒突破或应答不完全.对其系列血清标本的HBV DNA逆转录酶部分区域进行直接或克隆后测序,设计和应用PCR-RFLP方法对rt236位点的变异情况进行检测.采用Hamming距离法计算HBV部分逆转录酶区域的基因多样性.结果 1例患者出现rtA181V变异,3例为rtN236T变异.建立了基于限制性内切酶Dra I或Hpa/I的PCR-RFLP方法检测rtN236T变异:可以检测至少10%的弱势毒株,特异性为100%.在病毒突破前8个月可以检测到耐药毒株;该耐药毒株后来成为优势毒株.1例患者停用阿德福韦3个月后野生毒株取代耐药毒株重新成为优势株.1例患者在病毒突破后继续服用阿德福韦,rtN236T突变被一个新的突变株(rtN236V)替代.拉米夫定耐药患者的HBV逆转录酶有更明显的基因多样性.结论 建立了PCR-RFLP快速检测rtN236T变异的方法;阿德福韦耐药毒株可以表现为不同的转化过程.