Author(s): MAI Bo1, 2, QIN Zonghua2, YU Sanke1, YU Jinshu2, L minna2, WU Caiyan2, LIN Qing1, CAI Jianping2(1.collegeofanimalscienceandtechnology, NORTHWEST Scitechuniversityofagricultureandforestry, YANGLING 712100, china, 2.GUANGDONG Laboratoryofveterinarypublichealth/instituteofveterinarymedicine, GUANGDONG Academyofagriculturalsciences, GUANGZHOU 510640, china)
Pages: 751-755
Year: 2007 Issue:  9
Journal: Chinese Journal of Veterinary Science and Technolo
Keyword:  柔嫩艾美球虫;  表面抗原10;  基因克隆;  表达;  免疫;
Abstract: 从柔嫩艾美球虫第二代裂殖子总RNA中扩增EtSAG10基因,与pGEM-T Easy载体连接后转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,扩增不含N端信号肽的编码序列,分别插入表达载体pET-32a(+)和pMAL-c2X,转化至E.coliRosetta,以IPTG诱导表达。结果表明,pET-32a(+)-EtSAG10在E.coliRosetta中的表达产物约占菌体总蛋白的43%,融合蛋白分子质量约为47 ku,以包涵体形式存在;而pMAL-c2X-EtSAG10在E.coliRosetta中表达的重组蛋白为可溶性,表达产物约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白分子质量约为69 ku。以表达的可溶性EtSAG10重组蛋白100μg/只肌肉注射免疫雏鸡,攻虫后以盲肠病变计分、盲肠卵囊数(OPG)、相对增重率和抗球虫指数(ACI)评价,免疫组相对盲肠卵囊产量为47.7%,抗球虫指数由86.79提高至152.13。提示,重组表达的EtSAG10可诱导雏鸡产生一定的抗球虫免疫保护。