Author(s): BIAN Chuanzhou, QIAO Hongxing(zhengzhoucollegeofanimalhusbandry&engineering, ZHENGZHOU 450011, china)
Pages: 376-380
Year: 2006 Issue:  5
Journal: Chinese Journal of Veterinary Science and Technolo
Keyword:  传染性腔上囊病病毒;  VP2基因;  原核表达;  复性;
Abstract: 应用RT-PCR技术从传染性腔上囊病病鸡总RNA中克隆出1 461 bp的VP2基因,将其克隆于pET-28a载体,筛选并构建了pVP2表达载体。经IPTG诱导,在其宿主菌BL21(DE3) 中成功表达了53．7 ku的蛋白,SDS-PAGE和Western-blotting分析结果显示,VP2表达产物以包涵体形式存在,可与鸡IBDV抗血清及1株IBDV单抗发生特异性反应。将VP2表达产物进行纯化和复性,用复性前后的蛋白分别与特异性多抗进行Dot-ELISA检测,结果,复性后蛋白的反应活性比复性前增强了10倍;用复性后的蛋白与IBDV单抗进行Dot-ELISA,结果显示,VP2蛋白与单抗1H4、1E12、583、EA6、3C7反应强(+++);与4E4、1H11反应中度(++);与4E5、3C4、 1E11、3H9反应较弱;而与EC6、3D12、1A1无反应。