Studies on Establishment and Optimization of DDRT-PCR with Silver Staining in Cotton (Gossypium hirsutum L.)
Author(s): DAI Chang-bo, WANG Qing-lian, HU Gen-hai, GUO Min-min
Pages: 31
Year: 2008 Issue: 12
Journal: Journal of Henan Agricultural Sciences
Keyword: 棉花; 愈伤组织; 体系优化; mRNA差异显示; 银染;
Abstract: mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法.以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体系.最终确定了优化体系(50 μL)为:随机引物0.4 μmol/L,锚定引物0.4 μmol/L,dNTP 250 μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1.5 U,退火温度为39.3℃.利用优化后的体系对材料进行扩增,扩增产物特异性好、条带清晰、背景干净.该体系简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因.
Pages: 31
Year: 2008 Issue: 12
Journal: Journal of Henan Agricultural Sciences
Keyword: 棉花; 愈伤组织; 体系优化; mRNA差异显示; 银染;
Abstract: mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法.以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体系.最终确定了优化体系(50 μL)为:随机引物0.4 μmol/L,锚定引物0.4 μmol/L,dNTP 250 μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1.5 U,退火温度为39.3℃.利用优化后的体系对材料进行扩增,扩增产物特异性好、条带清晰、背景干净.该体系简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因.
Related Articles