Author(s): TANG Cheng-wu, LIU Shuo-jie, MA Yan-bin, LIANG liang, GUO Ping, WANG Shu-yu, GAO Hong, DUAN Qiu-hong, CHENG Ji-zhong, DAI Wu-xing
Pages: 412-416
Year: 2008 Issue:  6
Journal: Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases
Keyword:  日本血吸虫; 多基因DNA疫苗; 免疫保护作用;
Abstract: 目的 构建H本血吸虫多基因非融合性膜锚定表达疫苗pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,并研究其免疫原性及免疫保护作用.方法 构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Si14)、谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26)和副肌球蛋白(Sj97)的跨膜共表达质粒pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,转染HeLa细胞.通过RT-PCR法检测Sj14、Sj26和Sj97 mRNA的表达,免疫荧光(IFA)检测Sj14、Sj26和Sj97蛋白的表达.用纯化的该质粒免疫BALB/c小鼠(100μ/g只),设生理盐水和窄载体对照组,20只/组.每隔2周加强免疫1次,共免疫3次.末次免疫2周后,每组取10只小鼠,眼球取血并断颁处死,取脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞,,分别检测免疫小鼠血清巾总IgG抗体及脾淋巴细胞培养上清干扰素-γ(JFN-γ)水平,淋巴细胞刺激指数(SI)及NO释放量.并分析脾淋巴细胞亚群.各组巾余下小鼠每只经腹部感染40±1条尾蚴,45 d后剖杀,计数成虫数及肝卵数,计算减虫率和减卵率.结果 构建的质粒可在体外表达.疫苗组、牛理盐水组和空白质粒组血清总IgG抗体含量分别为(5.62±0.64)、(1.22±0.20)及(1.48±0.36)mg/ml,疫苗组与各对照组差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05).疫苗组、生理盐水组和空白质粒组小鼠腹腔巨噬细胞NO含量分别为(321.19±18.03)、(184.12±11.05)及(213.51±15.93)nmol/ml.疫苗组与生理盐水组问差异有统计学意义(P<0.05).疫苗组、生理盐水组,空白质粒组小鼠脾淋巴细胞刺激指数分别为(2.25±0.29)、(1.18±0.07)及(1.22±0.09),疫苗组显著升高(P<0.01).疫苗组INF-γ水平与各对照组相比,差异具有统汁学意义(P<0.01);CD4+和CD8+T细胞百分比明显升高.疫苗组减虫率和肝减卵率分别为39.9%和43.94%.结论 pIRES-Sj97-Si14-Sj26疫苗具有较强的免疫原性.可对日本血吸虫感染的小鼠产生一定保护作用.