Author(s): WU Yu-Dan, LI Bing, WANG Wen-Bing, WANG Dong, SHEN Wei-De
Pages: 466-472
Year: 2008 Issue:  5
Journal: ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
Keyword:  家蚕; 溶茧酶基因; 真核表达; 杆状病毒系统; Bac-to-Bac系统;
Abstract: 为了研究家蚕Bombyx mori溶茧酶基因(cocoonae)真核表达及其产物的生物活性,将溶茧酶基因(GenBank登录号EF428980) 克隆至杆状病毒转移载体pFastBacTM 1中获得pFast-cocoonase,将其转化DH10Bac感受态细胞后,PCR方法检测证实所分离的重组病毒DNA中含有目的片段溶茧酶基因.用脂质体法转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒.SDS-PAGE 分析显示,感染重组杆状病毒Bac-cocoonase的细胞表达产物在约为27.6 kD 处出现特异性条带,这与预测的蛋白大小相符.用该表达产物与茧丝反应后,电镜下观察茧丝的形态,结果表明表达产物对茧丝的丝胶层有一定的水解作用.