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PURIFICATION AND ANTIGENICITY ASSAY OF HUMAN INTERLEUKIN-21 EXPRESSED IN E.coli
Author(s): 
Pages: 41-43
Year: Issue:  1
Journal: ACTA ACADEMIAE MEDICAL QINGDAO UNIVERSITATIS

Keyword:  白细胞介素21基因表达免疫印迹法重组融合蛋白质类;
Abstract: 目的 在大肠杆菌中表达人IL-21编码基因,并进行蛋白纯化和抗原性分析.方法 以经PHA刺激的人扁桃体细胞cDNA 文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段.测序确认后,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,经PCR获得IL-21成熟肽的编码基因.将此IL-21基因插入表达载体pGEX-4T-2,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α,进行IPTG诱导表达.经琼脂糖珠结合的纯化方法所得产物用Western Blotting作抗原性分析.结果 SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α表达与理论相符的条带,并获得了与理论值相符的纯化条带,在进一步的Western Blotting分析中发现表达的蛋白能与IL-2的单抗产生结合反应.结论 人IL-21编码基因克隆载体在大肠杆菌中成功表达,同时建立了该蛋白的琼脂糖珠纯化方法,通过免疫印迹实验揭示了原核表达的IL-21蛋白与IL-2之间结构的相似性.
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