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Protocol Establishment of Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) for Analyzing Wheat Gluten Protein
Author(s): 
Pages: 1002-1009
Year: Issue:  5
Journal: SCIENTIA AGRICULTURA SINICA

Keyword:  小麦贮藏蛋白高效液相色谱定性和定量分析;
Abstract: [目的]反相高效液相色谱(RP-HPLC)是定性和定量分析小麦贮藏蛋白的有效方法,在国外的应用始于20世纪80年代初,但在国内一直没有利用,也无开展系统的研究.本研究的目的是填补国内这一研究的空白.[方法]选用2个代表性品种中优9507(强筋)和京411(弱筋),系统研究了柱温、洗脱梯度、样品量、提取时间和进样体积对贮藏蛋白分离效果和量化的影响,并验证了分析重复性.[结果]结果表明,45 mg面粉样品,使用50%正丙醇(v/v)和含有50%正丙醇(v/v)、1%二硫苏糖醇(w/v)的弱酸缓冲液(Tris-HCl,pH6.6),分别对醇溶蛋白和谷蛋白提取45 min,可以使提取率达到90%.醇溶蛋白和谷蛋白分别进样10~15 μl和15~20 μl,可以使实际量化值接近理论量化值.针对我国小麦品种贮藏蛋白组成的特殊性对洗脱梯度进行优化后,提高了高分子量谷蛋白亚基与低分子量谷蛋白亚基之间的分离度.[结论]配合聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)可以对贮藏蛋白各组分进行准确定性定量分析,为深入研究小麦贮藏蛋白和加工品质的关系提供了工具.
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