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Interference of HPV-6bE7 gene expression induced by small interfering RNA
Author(s): 
Pages: 213-217
Year: Issue:  3
Journal: CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY

Keyword:  人乳头状瘤病毒6bE7基因沉默小干扰RNA尖锐湿疣;
Abstract: 目的 研究靶向人乳头状瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚体小干扰RNA(siRNA-HPV-6bE7)对靶基因表达的沉默作用.方法 建立并筛选稳定表达HPV-6bE7基因的B16和293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-HPV-6bE7转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA表达情况.结果 用不同浓度的siRNA-HPV-6bE7转染细胞48 h,50nmol/L浓度对B16细胞中靶基因表达的抑制作用最强(抑制率87.05%),1 nmol/L抑制作用较低(9.14%);而在293T细胞,10 nmol/L的siRNA对靶基因表达的抑制效应最大(78.87%),1 nmol/L仍有一定抑制作用(46.92%).50 nmol/L siRNA-HPV-6bE7转染B16细胞后,靶基因的mRNA表达在24 h内开始受抑制(32.47%),48 h作用最强(74.72%),96 h作用很低(8.91%);25 nmol/L和10 nmol/L的siRNA转染293T细胞后,均在24 h内起效(26.66%、20.31%),抑制作用至少能维持72 h(65.93%、35.23%).结论 siRNA-HPV-6bE7对B16和293T细胞外源性靶基因表达均有较强的特异性沉默作用,在不同细胞株达到最大抑制效应的siRNA浓度不同,但时效曲线的变化趋势基本一致,siRNA均在24 h内起效,48~72 h达到高峰,抑制作用至少能维持72 h.本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据.
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