Author(s): YE Zhangqun, KONG Debo, CHEN Zhiqiang, YANG Weimin, YA Linfang, GUO Hui, LIU Guanlin, ZENG Lingqi
Pages: 148-150
Year: 2007 Issue:  2
Journal: JOURNAL OF CLINICAL UROLOGY
Keyword:  草酸杆菌; 甲酰辅酶A转移酶; 泌尿系结石; 基因克隆;
Abstract: 目的:探讨中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc)的分离、克隆和鉴定.方法:提取中国人肠道产甲酸草酸杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增frc基因片段并克隆人真核表达载体pEGFP-C1,重组质粒命名为pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定插入片段.将pEGFP-frc通过脂质体转染293细胞,通过逆转录PCR(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)分别从mRNA和蛋白水平检测frc基因在真核细胞中的表达.结果:中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因全长1287bp,存在53个碱基和4个氨基酸残基的变异,与GenBank中的frc基因的碱基序列的同源性为95.88%,氨基酸残基序列的同源性为99.07%.转染293细胞后24～72 h,可观察到明亮的绿色荧光,RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平上检测到frc基因在真核细胞中的表达.结论:中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出frc基因;中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因存在一定的变异;frc基因可在真核细胞293细胞中表达.