Author(s): HU Ying-chun, LIU Min-li, HUO Yan-ying, XIANG Xiao-qiong, LI Gang
Pages: 509-511
Year: 2006 Issue:  4
Journal: LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
Keyword:  小干扰RNA; 多效蛋白基因; 基因表达;
Abstract: 目的:设计多效蛋白基因特异性的小干扰RNA(siRNA),并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些siRNA的表达质粒,以便为在体外研究多效蛋白基因的功能打下基础.方法:设计并合成具有多效蛋白基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilencer 3.1-H1 hygro载体;用脂质体LipofectAMINE 2000转染和潮霉素筛选等方法建立能稳定表达相应siRNA的一组Pten-/-细胞克隆;利用Northern印迹检测这些细胞内多效蛋白基因的表达情况.结果:设计并构建了3个针对多效蛋白基因的siRNA表达质粒,并证明其中的1种质粒能在Pten-/-细胞内稳定表达相应的siRNA,并显著地抑制了该细胞多效蛋白基因的表达.结论:设计并构建出的针对多效蛋白基因的siRNA表达载体所表达的siRNA具有较强的RNA干涉功能,为多效蛋白基因的功能研究奠定了实验基础.