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Effect of opening of mitochondrial ATP-sensitive K+ channel on the distribution of cytochrome C and on proliferation of human pulmonary arterial smooth muscle cells in hypoxia
Author(s): 
Pages: 262-268
Year: Issue:  3
Journal: ACTA PHYSIOLOGICA SINICA

Keyword:  肺动脉平滑肌细胞缺氧线粒体膜电位线粒体膜ATP敏感钾通道细胞色素C;
Abstract: 为了探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP-sensitive K信号转导中的作用以及对缺氧肺动脉平滑肌细胞中细胞色素C在细胞内的分布及细胞增殖的影响,本实验将人肺动脉平滑肌细胞进行常氧或24 h缺氧培养,并将标本分为六组:(1)对照组;(2)mitoKATP开放剂diazoxide组;(3)mitoKATP阻断剂5-HD组;(4)24 h缺氧组;(5)24 h缺氧+diazoxide组;(6)24 h缺氧+5-HD组.利用激光共聚焦显微镜成像法检测△ψm;线粒体/胞浆成分分离试剂盒(BioVision)分离线粒体和胞浆成分后,Western blot检测两者细胞色素C;Western blot检测细胞中caspase-9的蛋白表达量;MTT法及PI染色后流式细胞仪检测细胞增殖情况.结果显示:(1)diazoxide作用24 h后,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均P<0.05;而5-HD作用24 h与正常对照组比较,上述指标无明显变化(P>0.05).(2)缺氧24 h组,结果与diazoxide组相似,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少,与正常对照组相比较,均P<0.05;24 h缺氧+diazoxide组与缺氧组相比较,R-123荧光明显增强,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显降低,caspase-9的蛋白表达显著减少,细胞增殖明显增多、凋亡减少(P<0.05);而24 h缺氧+5-HD组与缺氧组比较,R-123荧光明显降低,胞浆细胞色素C与线粒体细胞色素C的比值明显升高,caspase-9的蛋白表达显著增加,细胞增殖明显减少、凋亡增多(P<0.05).上述实验结果提示,缺氧可以引起mitoKATP的开放以及△ψm的去极化,并进而抑制细胞色素C从线粒体释放到胞浆,抑制线粒体凋亡途径,从而参与并影响肺动脉高压的发生、发展.
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