Author(s): PAN Xin, WANG Li-mei, LI Jing, LU Chang-lin, GENG Mei-yu
Pages: 149-155
Year: 2006 Issue:  2
Journal: BASIC & CLINICAL MEDICINE
Keyword:  神经细胞黏附因子L1; 基因表达; 细胞转染; PC12细胞;
Abstract: 目的获得重组神经细胞黏附因子L1(L1),研究其结构与功能的关系.方法通过RT-PCR方法,扩增出L1cDNA;构建原核表达pET 28 α+和真核表达pcDNA3.0载体;并构建L1胞外域不同结构基序的原核表达载体;将pETL1s转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BLL1s;将pcDNA3.0-L1真核表达质粒转染入PC12细胞中,筛选稳定表达L1的基因工程细胞株PC12-L;用原核表达的L1胞外不同结构域蛋白刺激PC12_L1基因工程细胞,观察其分化情况.结果IgI-FN5胞外域、Ig(Ⅰ-Ⅵ)免疫球蛋白样结构域和FN(1-5)纤连蛋白型Ⅲ重复序列均可明显促进PC12-L1细胞突起生长,具有生物学活性;Ig(Ⅴ-Ⅵ)也可促进PC12-L1细胞突起生长,但生物活性显著降低;FN(3-5)不能促进PC12-L1细胞突起生长,没有生物活性.结论L1分子胞外至少有2个结构域Ig(Ⅰ-Ⅵ)和FN(1-5)可显著促进PC12-L1细胞的突起生长,对L1分子生物活性的维持必不可少;胞外免疫球蛋白结构域Ig(Ⅴ-Ⅵ)对维持L1分子的生物活性不十分重要;纤连蛋白型Ⅲ重复序列结构域FN(3-5)对维持L1分子的生物活性不重要.